For første gang blev hold fra rækken under Football League inviteret til turneringen. Det var:

Nedrykkerne fra Division 3 1999-00, Chester City samt Rushden & Diamonds, Morecambe, Scarborough, Dover Athletic, Yeovil Town, Hereford United og Doncaster Rovers.

Følgende hold sad over i 1. runde:

Nord: Blackpool, Macclesfield Town, Shrewsbury Town og Walsall.

Syd: Leyton Orient, Reading, Swansea City og Swindon Town.

Football League Trophy, 2000-01, kampe
Se efter gruppe | Se efter dato
1. runde, Nord < 1999-00 | 2001-02 >
Tirsdag 28. november 2000
(4) 3-2 (5)
 
Tirsdag 5. december 2000
(5) 1-0 (4)
 
(5) 3-2 (4)
[efs, ord. tid: 0-0]
 
(3) 3-4 (4)
[efs, ord. tid: 3-3]
 
Onsdag 6. december 2000
(3) 3-1 (5)
 
Lørdag 9. december 2000
(3) 2-1 (4)
 
(3) 0-1 (4)
 
Mandag 11. december 2000
(4) 3-2 (4)
 
Tirsdag 12. december 2000
(4) 2-1 (4)
[efs, ord. tid: 1-1]
 
Tirsdag 9. januar 2001
(3) 2-3 (3)
[efs, ord. tid: 2-2]
 
(3) 3-0 (3)
 
(4) 0-4 (4)
 
1. runde, Syd < 1999-00 | 2001-02 >
Tirsdag 28. november 2000
(4) 2-0 (5)
 
Tirsdag 5. december 2000
(3) 1-1 (5)
[efs, ord. tid: 1-1] [str.:4-2]
Bournemouth videre efter forlænget spilletid og straffesparkskonkurrence.
 
(3) 4-1 (3)
 
(4) 2-0 (4)
 
(3) 2-0 (3)
 
(3) 4-1 (3)
 
(3) 1-0 (3)
 
(4) 3-0 (3)
 
(4) 2-0 (4)
 
(3) 1-0 (4)
 
Lørdag 9. december 2000
(4) 0-2 (3)
 
Tirsdag 19. december 2000
(5) 4-0 (5)
 
2. runde, Nord < 1999-00 | 2001-02 >
Tirsdag 9. januar 2001
(4) 4-2 (4)
 
(4) 2-3 (3)
 
(4) 3-1 (5)
 
(4) 3-1 (4)
 
Onsdag 10. januar 2001
(3) 2-0 (4)
 
(4) 2-0 (4)
 
Tirsdag 16. januar 2001
(3) 2-0 (5)
 
Tirsdag 30. januar 2001
(3) 2-1 (3)
 
2. runde, Syd < 1999-00 | 2001-02 >
Tirsdag 9. januar 2001
(3) 0-1 (3)
 
(4) 2-2 (3)
[efs, ord. tid: 2-2] [str.:2-4]
Brentford videre efter forlænget spilletid og straffesparkskonkurrence.
 
(3) 3-0 (4)
 
(5) 1-2 (3)
 
(4) 0-2 (3)
 
(3) 0-0 (3)
[efs] [str.:0-0]
Swindon videre efter forlænget spilletid og straffesparkskonkurrence.
 
(3) 1-3 (4)
 
(4) 3-1 (3)
 
3. runde, Nord < 1999-00 | 2001-02 >
Tirsdag 30. januar 2001
(3) 0-3 (4)
 
(4) 1-0 (4)
 
Tirsdag 6. februar 2001
(3) 4-0 (4)
 
Onsdag 7. februar 2001
(3) 4-0 (3)
 
3. runde, Syd < 1999-00 | 2001-02 >
Tirsdag 30. januar 2001
(4) 1-2 (3)
 
(4) 1-0 (3)
 
(3) 1-0 (3)
 
(3) 2-1 (3)
 
Del-semifinaler, Nord < 1999-00 | 2001-02 >
Tirsdag 13. februar 2001
(4) 4-1 (4)
 
(3) 2-1 (3)
[efs, ord. tid: 1-1]
 
Del-semifinaler, Syd < 1999-00 | 2001-02 >
Tirsdag 13. februar 2001
(4) 2-1 (3)
[efs, ord. tid: 1-1]
 
Onsdag 14. februar 2001
(3) 2-3 (3)
 
Del-finale, Nord < 1999-00 | 2001-02 >
1. kamp
Tirsdag 13. marts 2001
(4) 0-2 (3)
 
2. kamp
Tirsdag 20. marts 2001
(3) 0-0 (4)
Port Vale videre med 2-0 samlet.
 
Del-finale, Syd < 1999-00 | 2001-02 >
1. kamp
Tirsdag 13. marts 2001
(4) 1-2 (3)
 
2. kamp
Tirsdag 20. marts 2001
(3) 2-1 (4)
Brentford videre med 4-2 samlet.
 
Finale < 1999-00 | 2001-02 >
Søndag 22. april 2001
(3) 2-1 (3)
Vinder af Football League Trophy 2000-01: Port Vale (2. titel)