For første gang blev hold fra rækken under Football League inviteret til turneringen. Det var:

Nedrykkerne fra Division 3 1999-00, Chester City samt Rushden & Diamonds, Morecambe, Scarborough, Dover Athletic, Yeovil Town, Hereford United og Doncaster Rovers.

Følgende hold sad over i 1. runde:

Nord: Blackpool, Macclesfield Town, Shrewsbury Town og Walsall.

Syd: Leyton Orient, Reading, Swansea City og Swindon Town.

Football League Trophy, 2000-01, kampe Grupper | Dato
1. runde, Nord < 1999-00 | 2001-02 >
Tirsdag 28. november 2000  
  (4) 3-2 (5) 1.194
Tirsdag 5. december 2000  
  (5) 1-0 (4) 770
  (5) 3-2 (4) 1.453
      [efs, ord. tid: 0-0]      
  (3) 3-4 (4) 3.488
      [efs, ord. tid: 3-3]      
Onsdag 6. december 2000  
  (3) 3-1 (5) 2.336
Lørdag 9. december 2000  
  (3) 2-1 (4) 1.117
  (3) 0-1 (4) 1.545
Mandag 11. december 2000  
  (4) 3-2 (4) 1.538
Tirsdag 12. december 2000  
  (4) 2-1 (4) 777
      [efs, ord. tid: 1-1]      
Tirsdag 9. januar 2001  
  (3) 2-3 (3) 2.551
      [efs, ord. tid: 2-2]      
  (3) 3-0 (3) 1.919
  (4) 0-4 (4) 1.095
 
1. runde, Syd < 1999-00 | 2001-02 >
Tirsdag 28. november 2000  
  (4) 2-0 (5) 887
Tirsdag 5. december 2000  
  (3) 1-1 (5) 2.171
      [efs, ord. tid: 1-1] [str.:4-2]      
  Bournemouth videre efter forlænget spilletid og straffesparkskonkurrence.  
  (3) 4-1 (3) 1.517
  (4) 2-0 (4) 2.364
  (3) 2-0 (3) 1.555
  (3) 4-1 (3) 2.369
  (3) 1-0 (3) 2.075
  (4) 3-0 (3) 1.364
  (4) 2-0 (4) 1.000
  (3) 1-0 (4) 1.022
Lørdag 9. december 2000  
  (4) 0-2 (3) 1.370
Tirsdag 19. december 2000  
  (5) 4-0 (5) 853
 
2. runde, Nord < 1999-00 | 2001-02 >
Tirsdag 9. januar 2001  
  (4) 4-2 (4) 1.839
  (4) 2-3 (3) 1.917
  (4) 3-1 (5) 2.466
  (4) 3-1 (4) 962
Onsdag 10. januar 2001  
  (3) 2-0 (4) 1.015
  (4) 2-0 (4) 1.502
Tirsdag 16. januar 2001  
  (3) 2-0 (5) 2.507
Tirsdag 30. januar 2001  
  (3) 2-1 (3) 3.426
 
2. runde, Syd < 1999-00 | 2001-02 >
Tirsdag 9. januar 2001  
  (3) 0-1 (3) 3.810
  (4) 2-2 (3) 2.482
      [efs, ord. tid: 2-2] [str.:2-4]      
  Brentford videre efter forlænget spilletid og straffesparkskonkurrence.  
  (3) 3-0 (4) 3.781
  (5) 1-2 (3) 1.693
  (4) 0-2 (3) 946
  (3) 0-0 (3) 2.394
      [efs] [str.:0-0]      
  Swindon videre efter forlænget spilletid og straffesparkskonkurrence.  
  (3) 1-3 (4) 1.891
  (4) 3-1 (3) 1.694
 
3. runde, Nord < 1999-00 | 2001-02 >
Tirsdag 30. januar 2001  
  (3) 0-3 (4) 1.452
  (4) 1-0 (4) 1.357
Tirsdag 6. februar 2001  
  (3) 4-0 (4) 2.480
Onsdag 7. februar 2001  
  (3) 4-0 (3) 5.624
 
3. runde, Syd < 1999-00 | 2001-02 >
Tirsdag 30. januar 2001  
  (4) 1-2 (3) 1.438
  (4) 1-0 (3) 2.192
  (3) 1-0 (3) 2.516
  (3) 2-1 (3) 3.244
 
Del-semifinaler, Nord < 1999-00 | 2001-02 >
Tirsdag 13. februar 2001  
  (4) 4-1 (4) 2.540
  (3) 2-1 (3) 11.323
      [efs, ord. tid: 1-1]      
 
Del-semifinaler, Syd < 1999-00 | 2001-02 >
Tirsdag 13. februar 2001  
  (4) 2-1 (3) 3.337
      [efs, ord. tid: 1-1]      
Onsdag 14. februar 2001  
  (3) 2-3 (3) 2.222
 
Del-finale, Nord < 1999-00 | 2001-02 >
  1. kamp  
Tirsdag 13. marts 2001  
  (4) 0-2 (3) 4.813
 
  2. kamp  
Tirsdag 20. marts 2001  
  (3) 0-0 (4) 5.172
  Port Vale videre med 2-0 samlet.  
 
Del-finale, Syd < 1999-00 | 2001-02 >
  1. kamp  
Tirsdag 13. marts 2001  
  (4) 1-2 (3) 5.055
 
  2. kamp  
Tirsdag 20. marts 2001  
  (3) 2-1 (4) 6.579
  Brentford videre med 4-2 samlet.  
 
Finale < 1999-00 | 2001-02 >
Søndag 22. april 2001  
16.00 (3) 2-1 (3) 25.654
  Vinder af Football League Trophy 2000-01: Port Vale (2. titel)